免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(CO-IP)常用来研究蛋白质相互作用,将磁珠用于自动化的蛋白纯化过程可以大大提高实验的方便程度,同时改善结果的重复性。
在免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(CO-IP)实验中,推荐使用MP3(3.0 μm)磁性聚合物微球。该产品粒径适中,悬浮性较好,磁响应快。此外,其表面无孔的特性有助于降低非特异性吸附,提高结合蛋白的纯度。
当进行小规模高通量的蛋白纯化实验,如抗体展示时,MA 系列磁珠则更为合适,因为其水凝胶类型的基架具有极高的孔隙率和蛋白结合容量,即使抗体表达浓度较高也只需很少的磁珠即可完全结合。
应用案例—— MA-Protein A 磁珠从细菌裂解液中提纯抗体
将一定量的人IgG 加入到大肠杆菌裂解液中,构建类似于细胞表达抗体后的裂解液蛋白混合物,可用于评估磁珠对抗体的提纯效果。
结论:MA-Protein A磁珠可以有效地从细菌裂解液蛋白混合物中纯化人IgG。纯化后的洗脱液中只有IgG的单一条带,分子量为150kD左右,蛋白保持完整,无降解。样本a)和样本b)中人IgG加入总量分别为40 μg和80 μg,经过磁珠纯化后,回收得到蛋白量分别为29 μg和62 μg,平均回收率在75%左右。