光路准直微球(Alignment Beads)

目的：精确评估光路与液流系统

光路准直微球被设计用来提供对流式细胞仪核心性能——光路准直和液流稳定性的最灵敏的检测。当激光束精确聚焦于样本流核心，并且细胞/微球以恒定速度稳定通过检测点时，信号的变异（CV%）会最小。

特性要求：

• 极低的固有CV% (< 3%)：这是Alignment Beads的核心指标。它们自身高度均一，因此任何测得的CV%增大都更可能归因于仪器问题（光路偏离、液流脉动等）。

    • 为什么要求如此之低的CV%？因为即使是微小的光路偏移或液流波动，也会导致所有信号（包括样本细胞）的CV%增大，影响分辨率和区分微弱信号的能力。Alignment Beads提供了一个远超常规需求的基准，能捕捉到早期或轻微的问题。

•  所有通道（荧光和散射光）均要求低CV%：光路和液流问题会同时影响荧光和散射光信号的收集效率和稳定性。

关于3 μm粒径选择与Mie氏散射：

选择3 μm作为Alignment Beads的常用尺寸，尤其对于控制散射光CV%有其物理学原因。

• Mie氏散射理论：该理论描述了尺寸与光波长相当的球形颗粒（如微球）对光的散射行为。散射光强度不仅与颗粒大小有关，其对大小变化的敏感度也随尺寸变化。

• 3 μm 区域的特性：根据Mie理论计算，对于可见光波长的激光，大约在3 μm粒径附近，散射光强度（特别是前向角散射FSC）随粒径微小变化的敏感度相对较低。这意味着，即使微球存在极细微的尺寸差异（制造工艺无法达到绝对完美），在3 μm尺寸下，这种差异对散射光强度的影响也相对较小。

• 更大粒径的问题：当粒径增大（例如> 5 μm），散射光强度随粒径变化的曲线通常变得更加陡峭。此时，即使微球具有同样高水平的尺寸均一性，微小的尺寸差异也会导致散射光信号产生更大的波动，使得散射光的CV%很难控制在3%以下。

结论：使用高度均一的3 μm微球，更容易将散射光CV%也控制在极低水平（<3%），从而更准确地反映仪器光路和液流本身的稳定性，而非微球自身尺寸波动带来的影响。

当Alignment Beads的CV%超标时，通常指示需要进行仪器维护（如光路调整、液流系统清洗）